Tauben-Paramyxovirus Typ 1 (PPMV-1) RNA-Testkit - RT-qPCR

Beschreibung

Katalog Nr.: AP2409006Spezifikation: 50T / 100TLagerung: -20°C


Produktübersicht:

Die Tauben-Paramyxovirus Typ 1 (PPMV-1) RNA-Nachweiskit ist ein hochempfindliches RT-qPCR-Diagnoseinstrument zur Identifizierung von PPMV-1an RNA-Virus das bewirkt Newcastle-Krankheit bei Tauben. Zu den klinischen Anzeichen bei infizierten Vögeln gehören Durchfall, Beinlähmung, Zittern und neurologische Symptome.

PPMV-1 ist hoch ansteckendmit einer hohen Morbiditäts- und Mortalitätsrate. Sie verbreitet sich schnell über orale, respiratorische, okulare, reproduktive und sogar wundbedingte Routen. Eine rechtzeitige und genaue Erkennung ist für die Krankheitsbekämpfung, die Verhinderung von Sekundärinfektionen und die Eindämmung von Ausbrüchen unerlässlich.

Dieser Kit basiert auf konservierten Gensequenzen von PPMV-1 und wurde optimiert für Schnellnachweis in Mund-/Kehlkopfabstrichen, Blut und Geweben von Tauben und anderen Vogelarten über Quantitative reverse Transkription in einem Schritt PCR (RT-qPCR).


Wesentliche Merkmale:

  • RT-qPCR in einem Schritt für den direkten RNA-Nachweis

  • Anwendbar auf Abstriche, Blut (EDTA), Gewebehomogenate

  • Enthält Positiv- und Negativkontrollen

  • Schnelle Ergebnisse, hohe Sensitivität und Spezifität

  • Lange Lagerfähigkeit: ≥12 Monate bei -20°C

  • Ideal für Taubenzüchter, Vogellabors und die tierärztliche Überwachung


Bestandteile des Bausatzes:

Komponente50T100T
PPMV-1-Reaktionspuffer575 µL1150 µL
PPMV-1 Vormischung575 µL1150 µL
PPMV-1 Positive Kontrolle100 µL100 µL
Negative Kontrolle100 µL100 µL

Probenarten und Anforderungen:

  • Mund-/Kehlkopfabstriche: Sterile Tupfer, gelagert bei 2-8°C (innerhalb von 24h) oder -20°C

  • Vollblut: Nur verwenden EDTA-AntikoagulansHeparin vermeiden; Lagerung ≤7 Tage bei 2-8°C oder ≤3 Monate bei -20°C

  • Gewebe≤100 mg frisches Muskel- oder Organgewebe, homogenisiert in 200-500 µl sterilem Wasser

Die RNA-Extraktion sollte mit dem MD023 Sicheres RNA-Extraktionskit oder gleichwertig. Die extrahierte RNA sollte bei 4°C (≤7 Tage) oder -20°C (≤6 Monate) gelagert werden.


RT-qPCR-Reaktionsaufbau:

  1. Reagenzien auftauen und kurz zentrifugieren.

  2. Für n Proben + 2 Kontrollenmischen:

    • (n+2) × 11,5 µL PPMV-1-Reaktionspuffer

    • (n+2) × 11,5 µL PPMV-1 Vormischung

  3. Gut mischen und dosieren 23 µL pro PCR-Gefäß

  4. hinzufügen 2 µL Probe-RNA, positiv, oder negative Kontrolle

  5. Endgültiges Reaktionsvolumen: 25 µL


PCR-Zyklusbedingungen:

SchrittTemperaturZeit
Umgekehrte Transkription50°C10 min
Vor-Denaturierung95°C2 min
PCR-Amplifikation (×40)95°C5 Sekunden
59°C35 Sekunden (FAM-Kanal)

Kompatibel mit ABI und anderen Echtzeit-PCR-Plattformen. ROX-Farbstoff optional.


Interpretation der Ergebnisse:

  • Positiv: Ct ≤ 33 mit deutlicher "S"-Kurve

  • Verdacht: 33 < Ct < 38 → Wiederholungsprüfung empfehlen

  • Negativ: Ct ≥ 38 oder keine Amplifikationskurve

Anforderungen an die Kontrolle:

  • Positive Kontrolle: Ct < 28

  • Negative Kontrolle: Ct ≥ 38 oder kein Ct-Wert


Vorsichtsmaßnahmen:

  1. Durchführung in getrennten Arbeitsbereichen: RNA-Vorbereitung, Reagenzien-Setup und PCR-Amplifikation

  2. Tragen Sie Handschuhe und einen Laborkittel, und verwenden Sie für jeden Bereich separate Pipetten und Geräte.

  3. Wiederholte Gefrier-Auftau-Zyklen vermeiden; Reagenzien vor Licht schützen

  4. Nur für Forschungszwecke; nicht für die klinische Diagnose bestimmt

  5. Desinfizieren Sie den Arbeitsbereich und die Geräte regelmäßig mit Alkohol, Chlor oder UV-Licht.


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