Kit de détection de l'acide nucléique de Salmonella UNG (PCR en temps réel 50T/100T)

Numéro de catalogue : AP2409004
Spécifications : 50 tests / 100 tests
Stockage : -20°C

Description du produit

Les Kit de détection de l'acide nucléique de Salmonella est un système en temps réel PCR conçu pour la détection rapide, spécifique et sensible du ADN de salmonelle dans divers types d'échantillons, notamment les selles, l'eau, les tissus et les aliments. Les salmonelles sont un important agent pathogène d'origine alimentaire, communément transmis par des œufs, de la volaille et de la viande contaminés.

Ce kit utilise PCR quantitative (qPCR) à base de sondes fluorescentes pour amplifier un fragment spécifique du génome de Salmonella. Les résultats sont déterminés par les valeurs Ct (seuil de cycle) ou par la quantification de la courbe standard pour estimer la charge bactérienne dans l'échantillon.

Caractéristiques principales

• ✅ Spécificité et sensibilité élevées en utilisant la méthode de la sonde fluorescente TaqMan

• Compatible avec plusieurs systèmes de PCR en temps réel (canal FAM)

• Comprend des contrôles positifs et négatifs pour la validation des résultats

• ✅ L'enzyme UNG est incluse pour éliminer la contamination résiduelle.

• ✅ Convient au contrôle de la sécurité alimentaire, au diagnostic des maladies animales et à la recherche

Composants du kit

Types d'échantillons et préparation

• Écouvillons (oral/cloacal): Pour les oiseaux et les volailles, insérer un écouvillon stérile dans la gorge et le cloaque, tourner doucement, puis transférer dans un tube à centrifuger stérile.

• Sang total: Utilisation Anticoagulant EDTA uniquement. Ne pas utiliser d'héparine. Il est recommandé d'utiliser du sang frais. Conserver à 2-8°C jusqu'à 7 jours, ou à -20°C jusqu'à 3 mois.

• Échantillons de tissus: Utiliser ≤100 mg de foie ou d'autres tissus, homogénéiser avec 200-500 μL d'eau stérile.

Remarque : Un pré-enrichissement est nécessaire en fonction GB 4789.4-2016 ou équivalent. Enrichissement suggéré dans un bouillon BPW (1:10 p/v), suivi d'une incubation à 36 ± 1°C pendant 8 à 18 heures.

Veuillez utiliser Kit d'extraction DN/ARN (Cat. No. DP201) ou une méthode équivalente pour extraire les acides nucléiques. L'ADN extrait doit être conservé dans la glace et testé rapidement (≤7 jours à 4°C ou ≤6 mois à -20°C).

Protocole PCR

1. Préparation du mélange réactionnel :

   • Décongeler tous les réactifs à température ambiante et centrifuger brièvement.

   • Distribuer 23 μL de mélange PCR Salmonella dans chaque tube PCR.

   • Ajouter 2 μL d'ADN d'échantillon, de contrôle positif ou de contrôle négatif dans chaque tube, respectivement.

   • Dernier volume : 25 μL par réaction.

2. Programme PCR :

   • Traitement UNG : 50°C pendant 2 minutes

   • Dénaturation initiale : 95°C pendant 5 minutes

   • 40 cycles :

     • Dénaturation : 95°C pendant 10 secondes

     • Recuit/extension : 60°C pendant 35 secondes (signal FAM recueilli)

3. Canal de fluorescence :

   • FAM (pour la série ABI et d'autres instruments qPCR)

   • Ajouter le colorant de référence ROX si l'instrument l'exige.

Interprétation des résultats

Remarque : les résultats suspects peuvent être dus à des inhibiteurs (par exemple, l'alcool, les anticoagulants) ou à un faible rendement d'ADN. Si la contamination par aérosol est exclue et que le Ct est <35 lors du nouveau test, le résultat est considéré comme positif.

Critères de contrôle de la qualité

• Contrôle positif : FAM Ct <28 avec courbe d'amplification en forme de S

• Contrôle négatif : Pas de Ct ou Ct ≥40 sans courbe en S

• Dans le cas contraire, les résultats sont considérés comme non valables et un nouveau test est nécessaire.

Précautions

1. Flux de travail par zones : Séparer physiquement les zones de pré-PCR, de préparation des réactifs et d'amplification. Porter un équipement de protection et changer de gants entre les zones.

2. Éviter la contamination : Retarder l'ouverture du tube après la PCR pour éviter la formation d'aérosols. La stérilisation UV ou chimique du matériel est fortement recommandée.

3. Cycles de gel/dégel : Éviter les congélations-décongélations répétées des réactifs. Décongeler complètement et mélanger délicatement avant utilisation.

4. Réservé à la recherche : Ce kit est destiné à la recherche scientifique et le contrôle de la sécurité alimentaire/environnementale uniquement. Ne pas utiliser pour le diagnostic clinique.

Stockage et durée de conservation

• Magasin à -20°C

• Valable pour au moins 12 mois s'il n'est pas ouvert et s'il est correctement stocké

• Protéger de la lumière et des cycles répétés de congélation-décongélation