Kit per il rilevamento dell'acido nucleico di Salmonella UNG (PCR in tempo reale 50T/100T)

Descrizione

Numero di catalogo: AP2409004
Specifiche: 50 test / 100 test
Stoccaggio: -20°C

Descrizione del prodotto

Il Kit per il rilevamento dell'acido nucleico della salmonella è un sistema in tempo reale PCR test progettato per la rilevazione rapida, specifica e sensibile di DNA della salmonella in diversi tipi di campioni, tra cui feci, acqua, tessuti e alimenti. La salmonella è un importante agente patogeno di origine alimentare comunemente trasmesso attraverso uova, pollame e carne contaminati.

Questo kit utilizza PCR quantitativa basata su sonde fluorescenti (qPCR) per amplificare un frammento specifico del genoma di Salmonella. I risultati sono determinati dai valori Ct (soglia di ciclo) o tramite la quantificazione della curva standard per stimare la carica batterica nel campione.

Caratteristiche principali

• ✅ Alta specificità e sensibilità utilizzando il metodo della sonda a fluorescenza TaqMan

• ✅ Compatibile con più sistemi di PCR in tempo reale (canale FAM)

• Include controlli positivi e negativi per la convalida dei risultati.

• L'enzima UNG è incluso per eliminare la contaminazione da carryover.

• Adatto per il monitoraggio della sicurezza alimentare, la diagnostica delle malattie animali e la ricerca.

Componenti del kit

Tipi di campioni e preparazione

• Tamponi (orali/cloacali): Per i volatili e il pollame, inserire un tampone sterile nella gola e nella cloaca, ruotare delicatamente, quindi trasferire in una provetta da centrifuga sterile.

• Sangue intero: Utilizzo Solo anticoagulante EDTA. Non utilizzare eparina. Si consiglia di utilizzare sangue fresco. Conservare a 2-8°C per un massimo di 7 giorni o a -20°C per un massimo di 3 mesi.

• Campioni di tessuto: Utilizzare ≤100 mg di fegato o altri tessuti, omogeneizzare con 200-500 μL di acqua sterile.

Nota: Il pre-arricchimento è richiesto in base a GB 4789.4-2016 standard o equivalenti. Si suggerisce l'arricchimento in brodo BPW (1:10 w/v), seguito da incubazione a 36 ± 1°C per 8-18 ore.

Si prega di utilizzare Kit di estrazione DN/RNA (n. cat. DP201) o un metodo equivalente per estrarre gli acidi nucleici. Il DNA estratto deve essere conservato in ghiaccio e analizzato tempestivamente (≤7 giorni a 4°C o ≤6 mesi a -20°C).

Protocollo PCR

1. Preparazione della miscela di reazione:

   • Scongelare tutti i reagenti a temperatura ambiente e centrifugare brevemente.

   • Dispensare 23 μL di miscela PCR Salmonella in ciascuna provetta PCR.

   • Aggiungere rispettivamente 2 μL di DNA campione, controllo positivo o controllo negativo in ciascuna provetta.

   • Volume finale: 25 μL per reazione.

2. Programma PCR:

   • Trattamento UNG: 50°C per 2 min

   • Denaturazione iniziale: 95°C per 5 min.

   • 40 cicli:

     • Denaturazione: 95°C per 10 secondi

     • Ricottura/estensione: 60°C per 35 secondi (raccolta del segnale FAM)

3. Canale di fluorescenza:

   • FAM (per la serie ABI e altri strumenti qPCR)

   • Aggiungere il colorante di riferimento ROX se richiesto dallo strumento.

Interpretazione dei risultati

Nota: i risultati sospetti possono essere causati da inibitori (ad esempio, alcol, anticoagulanti) o da una bassa resa di DNA. Se si esclude la contaminazione da aerosol e il Ct è <35 al momento del test, il risultato è considerato positivo.

Criteri di controllo della qualità

• Controllo positivo: FAM Ct <28 con curva di amplificazione a forma di S

• Controllo negativo: Nessun Ct o Ct ≥40 senza curva S

• In caso contrario, i risultati sono considerati non validi ed è necessario ripetere il test.

Precauzioni

1. Flusso di lavoro suddiviso in zone: Utilizzare una separazione fisica per le aree di pre-PCR, di preparazione dei reagenti e di amplificazione. Indossare indumenti protettivi e cambiare i guanti tra una zona e l'altra.

2. Evitare la contaminazione: Ritardare l'apertura della provetta dopo la PCR per evitare la generazione di aerosol. Si raccomanda vivamente la sterilizzazione UV o chimica delle apparecchiature.

3. Cicli di congelamento/scongelamento: Evitare di congelare e scongelare ripetutamente i reagenti. Scongelare completamente e mescolare delicatamente prima dell'uso.

4. Solo per uso di ricerca: Questo kit è per ricerca scientifica e per lo screening della sicurezza alimentare/ambientale. Non per uso diagnostico clinico.

Conservazione e durata di conservazione

• Conservare presso -20°C

• Valido per almeno 12 mesi se non aperto e correttamente conservato

• Proteggere dalla luce e da ripetuti cicli di congelamento e scongelamento