サルモネラ菌UNG核酸検出キット（リアルタイムPCR 50T/100T）

説明

カタログ番号 AP2409004
仕様 50テスト／100テスト
ストレージ： -20°C

商品説明

について サルモネラ核酸検出キット はリアルタイム PCR を迅速、特異的、高感度に検出するためにデザインされたアッセイである。 サルモネラ菌DNA サルモネラ菌は、便、水、組織、食品など様々な種類のサンプルで検出される。サルモネラは、汚染された卵、鶏肉、食肉を通じて一般的に感染する主要な食品由来病原体である。

このキットは 蛍光プローブベースの定量的PCR（qPCR） 技術を用いて、サルモネラゲノムの特定の断片を増幅します。結果は、Ct（サイクル閾値）値、またはサンプル中の細菌量を推定するための標準曲線定量によって決定されます。

主な特徴

• ✅ 高い特異性と感度 TaqMan蛍光プローブ法を用いて

• ✅ 複数のリアルタイムPCRシステムに対応（FAMチャンネル）

• ✅ 結果検証用の陽性対照と陰性対照を含む。

• ✅ UNG 酵素が含まれ、キャリーオーバーによる汚染を排除

• 食品安全モニタリング、動物疾病診断、研究に適している ✅ 食品安全モニタリング、動物疾病診断、研究に適している

キット・コンポーネント

サンプルの種類と準備

• 綿棒（口腔/鼻腔）:鳥や家禽の場合、滅菌綿棒を喉と肛門に挿入し、軽く回転させた後、滅菌遠心チューブに移す。

• 全血:用途 EDTA抗凝固剤のみ.ヘパリンは使用しないこと。新鮮な血液を推奨する。2～8℃で7日間、-20℃で3ヶ月間保存できます。

• 組織サンプル:100mg以下の肝臓またはその他の組織を使用し、200～500μLの滅菌水でホモジナイズする。

注： 事前強化は、以下の条件を満たす必要がある。 GB 4789.4-2016 標準品または同等品。BPWブロス（1:10 w/v）で濃縮し、36±1℃で8～18時間培養することを推奨。

ご利用ください DN/RNA抽出キット（カタログ番号DP201） または同等の方法で核酸を抽出する。抽出したDNAは氷上に保存し、速やかに検査する（4℃で7日以下、または-20℃で6ヶ月以下）。

PCRプロトコル

1. 反応液の調製：

   • すべての試薬を室温で解凍し、短時間遠心する。

   • 各PCRチューブに23μLのSalmonella PCR mixを分注する。

   • サンプルDNA、陽性コントロール、陰性コントロールをそれぞれ2μLずつ各チューブに加える。

   • 最終巻： 反応あたり25μL.

2. PCRプログラム：

   • UNG処理：50℃、2分間

   • 初期変性：95℃、5分間

   • 40サイクル：

     • 変性：95℃、10秒

     • アニーリング/伸長：60℃、35秒（FAMシグナル採取）

3. 蛍光チャンネル：

   • FAM（ABIシリーズおよびその他のqPCR装置用）

   • 装置によって必要であれば、ROX参照色素を加える。

結果の解釈

注：疑わしい結果は、阻害剤（例：アルコール、抗凝固剤）またはDNA収量の低下によって引き起こされる可能性があります。エアロゾルによる汚染が除外され、再検査でCtが35未満の場合、結果は陽性とみなされます。

品質管理基準

• ポジティブコントロール： FAM Ct <28でS字型増幅曲線

• ネガティブコントロール： CtなしまたはCt≧40でS字カーブなし

• そうでない場合、結果は無効とみなされ、再検査が必要となる。

注意事項

1. ゾーン化されたワークフロー： プレPCR、試薬セットアップ、増幅エリアは物理的に分離する。保護具を着用し、ゾーン間で手袋を交換する。

2. 汚染を避ける： エアロゾルの発生を避けるため、PCR後のチューブ開封を遅らせる。装置のUVまたは化学滅菌を強く推奨する。

3. 凍結融解サイクル： 試薬の繰り返しの凍結融解は避ける。使用前に完全に解凍し、軽く混ぜる。

4. 研究用のみ： このキットは 科学研究 および食品/環境安全性スクリーニングのみ。臨床診断用ではない。

保存と賞味期限

• 店舗 -20°C

• 有効期間 12ヶ月 未開封で適切に保管されている場合

• 光と繰り返しの凍結融解サイクルから保護する。