Kit de détection PCR en temps réel de la grippe aviaire (virus de sous-type H1N1)

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Nom du produit (EN) : Grippe aviaire Kit de test
Taille de l'emballage : 50 tests
Prix : Contacter notre service commercial
Stockage : Transport à basse température ; stockage à -20°Cvalable 12 mois
Expédition à partir de : Shanghai, Chine
Réservé à la recherche


Vue d'ensemble du kit de test pour la grippe aviaire

Ce kit de test de l'influenza aviaire est spécialement conçu pour l'analyse de l'influenza aviaire. détection qualitative et quantitative de l'ARN du sous-type H1N1 du virus de la grippe A en utilisant technologie qRT-PCR fluorescente basée sur des sondes. En ciblant les régions génétiques conservées du sous-type H1N1, le kit offre une spécificité et une sensibilité élevées pour la détection du virus de la grippe aviaire A dans les échantillons biologiques et environnementaux.

Contrairement à la PCR basée sur le colorant SYBR Green, cette Système à base de sondes TaqMan utilise des sondes marquées par fluorescence qui émettent des signaux uniquement lors de l'hybridation et du clivage au cours de l'amplification, ce qui garantit que spécificité supérieure et des taux de faux positifs plus faibles.


Caractéristiques principales

Très spécifique et sensible - Conçu sur la base de régions hautement conservées du génome H1N1 ; pas de réaction croisée avec des virus non ciblés
Système prêt à l'emploi - Nécessite uniquement un modèle d'ARN de la part de l'utilisateur
Amorces et sondes optimisées - Assure une amplification et une détection efficaces
Contrôle positif inclus - ADN synthétique non infectieux pour la validation des résultats
Applications quantitatives et qualitatives - Convient à la recherche, à la surveillance et au dépistage
Compatible avec les principaux instruments qPCR - Détection de la fluorescence sur le canal FAM


Contenu du kit (50 tests)

Description du composantCodeVolume et couleur du bouchon
Tampon qRT-PCR (système de sonde)A500 µL
Mélange enzymatique pour qRT-PCRB100 µL
Tampon de dilution du modèle PCRC1 ml
Mélange d'amorces qRT-PCR pour le H1N1D100 µL
Sonde pour le sous-type H1N1E50 µL
ADN de contrôle positif (1×10⁸ copies/μL)F50 µL
Réactif de libération de l'ARN (essai, méthode sans extraction)G20 essais
Manuel de l'utilisateurH1 exemplaire

Comment ça marche

Le kit détecte l'ARN viral par une réaction PCR de transcription inverse en une seule étape. Pendant l'amplification, l'ARN La Taq polymérase clive la sonde à double marquageL'ARN cible est un ARN qui se trouve à l'intérieur de l'appareil et qui sépare le fluorophore du quencher, ce qui produit un signal de fluorescence proportionnel à la quantité d'ARN cible présente.

La fluorescence est mesurée au cours de chaque cycle, ce qui permet suivi en temps réel du processus PCR.


Principe de détection

  • Valeur Ct (seuil de cycle) : Nombre de cycles PCR nécessaires pour que la fluorescence dépasse le seuil. Un Ct plus bas indique une quantité cible initiale plus élevée.

  • Réglage du seuil : Basé sur une déviation standard de 10× la fluorescence des 3-15 cycles initiaux (fond).


Critères de performance et d'exclusion

Type de résultatCritères
PositifCt ≤ 35 avec une courbe d'amplification typique en forme de S
Susceptible d'être positifCt 35-40 → Répétition du test recommandée
NégatifCt ≥ 40 ou pas de Ct + pas de courbe d'amplification

Les contrôles positifs et négatifs doivent passer les contrôles de qualité. Ct du contrôle négatif ≥40 et Ct du contrôle positif ≤30 avec amplification exponentielle.


Protocole de réaction

Transcription inverse + PCR (20 μL par réaction)

RéactifVolume
Tampon qRT-PCR10 μL
Mélange d'enzymes2 μL
Mélange d'amorces2 μL
Sonde1 μL
Modèle d'ARN ou contrôle5 μL
  • Volume total : 20 μL

  • Conditions de cyclage thermique :

ÉtapeTempératureL'heure
Transcription inversée50°C30 minutes
Dénaturation initiale94°C10 min
Cyclage PCR × 40
- Dénaturation94°C15 secondes
- Recuit/extension60°C1 min (FAM)

Quantification (facultatif)

Préparer un courbe standard en utilisant des dilutions en série de 10 fois (10²-10⁷ copies/μL) du contrôle ADN synthétique. Tracer les valeurs Ct en fonction du log(concentration) pour interpoler le nombre de copies d'ARN dans les échantillons inconnus.


Avantages de la PCR à base de sondes par rapport au SYBR Green :

FonctionnalitéVert SYBRBasé sur une sonde (ce kit)
SpécificitéSe lie à tous les ADNdbSe lie uniquement à une séquence cible spécifique
Risque de faux positifsPlus élevéPlus bas
CoûtPlus basPlus élevé (mais plus fiable)
Facilité d'utilisationPlus simpleNécessite la conception d'une sonde

Utilisation prévue

Ce produit est à des fins de recherche uniquement. Il n'est pas approuvé pour diagnostics cliniques ou des procédures thérapeutiques.

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