Testkit für Vogelgrippe (Virus des Subtyps H1N1) Real-Time PCR-Nachweiskit

Beschreibung

Produktname (EN): Aviäre Influenza Test-Kit
Packungsgröße: 50 Tests
Preis: Kontakt zu unserem Vertrieb
Lagerung: Transport bei niedriger Temperatur; Lagerung bei -20°C, gültig für 12 Monate
Versand von: Schanghai, China
Nur für Forschungszwecke


Vogelgrippe-Testkit Übersicht

Dieses Testkit für Vogelgrippe wurde speziell für den qualitativer und quantitativer Nachweis von Influenza-A-Virus H1N1-Subtyp-RNA mit sondenbasierte fluoreszierende qRT-PCR-Technologie. Durch die Ausrichtung auf konservierte genetische Regionen des H1N1-Subtyps bietet der Kit eine hohe Spezifität und Sensitivität beim Nachweis des Vogelgrippe-A-Virus in biologischen und Umweltproben.

Im Gegensatz zur PCR mit SYBR-Grün-Farbstoff ist diese Auf TaqMan-Sonden basierendes System verwendet fluoreszenzmarkierte Sonden, die nur bei der Hybridisierung und Spaltung während der Amplifikation Signale aussenden. höhere Spezifität und geringere falsch-positive Raten.


Wesentliche Merkmale

Hochgradig spezifisch und empfindlich - Entwickelt auf der Grundlage hoch konservierter Regionen des H1N1-Genoms; keine Kreuzreaktion mit Nicht-Zielviren
Gebrauchsfertiges System - Benötigt nur eine RNA-Vorlage vom Benutzer
Optimierte Primer und Sonden - Sorgt für effiziente Amplifikation und Detektion
Inklusive Positivkontrolle - Synthetische nicht-infektiöse DNA zur Ergebnisvalidierung
Quantitative & Qualitative Anwendungen - Geeignet für Forschung, Überwachung und Screening
Kompatibel mit den wichtigsten qPCR-Instrumenten - Fluoreszenznachweis auf dem FAM-Kanal


Inhalt des Kits (50 Tests)

Komponente BeschreibungCodeVolumen & Kappenfarbe
qRT-PCR-Puffer (Sondensystem)A500 µL
qRT-PCR-Enzym-MixB100 µL
PCR-Vorlage VerdünnungspufferC1 mL
qRT-PCR-Primer-Mix für H1N1D100 µL
Sonde für H1N1-SubtypE50 µL
Positive Kontroll-DNA (1×10⁸ Kopien/μL)F50 µL
RNA-Release-Reagenz (Versuch, extraktionsfreie Methode)G20 Tests
BenutzerhandbuchH1 Exemplar

Wie es funktioniert

Das Kit weist virale RNA durch eine einstufige PCR-Reaktion mit reverser Transkription nach. Während der Amplifikation wird die Die Taq-Polymerase spaltet die doppelt markierte SondeDadurch wird der Fluorophor vom Quencher getrennt, was zu einem Fluoreszenzsignal führt, das proportional zur Menge der vorhandenen Ziel-RNA ist.

Die Fluoreszenz wird bei jedem Zyklus gemessen, so dass Echtzeit-Überwachung des PCR-Prozesses.


Prinzip der Detektion

  • Ct-Wert (Zyklus-Schwellenwert): Die Anzahl der PCR-Zyklen, die erforderlich sind, damit die Fluoreszenz den Schwellenwert überschreitet. Ein niedriger Ct-Wert weist auf eine höhere anfängliche Zielmenge hin.

  • Einstellung des Schwellenwerts: Basierend auf der 10-fachen Standardabweichung der Fluoreszenz bei den ersten 3-15 Zyklen (Hintergrund).


Leistung und Abschneidekriterien

Ergebnis TypKriterien
PositivCt ≤ 35 mit einer typischen S-förmigen Amplifikationskurve
Verdacht positivCt 35-40 → Wiederholung des Tests empfohlen
NegativCt ≥ 40 oder kein Ct + keine Amplifikationskurve

Positiv- und Negativkontrollen müssen Qualitätskontrollen bestehen. Ct der Negativkontrolle ≥40 und Ct der Positivkontrolle ≤30 bei exponentieller Amplifikation.


Reaktionsprotokoll

Reverse Transkription + PCR (20 μl pro Reaktion)

ReagenzBand
qRT-PCR-Puffer10 μL
Enzym-Mix2 μL
Primer-Mix2 μL
Sonde1 μL
RNA-Vorlage oder Kontrolle5 μL
  • Gesamtvolumen: 20 μL

  • Thermische Zyklusbedingungen:

SchrittTemperaturZeit
Umgekehrte Transkription50°C30 min
Initiale Denaturierung94°C10 min
PCR-Zyklen × 40
- Denaturierung94°C15 Sekunden
- Glühen/Verlängerung60°C1 Minute (FAM)

Quantifizierung (fakultativ)

Bereiten Sie eine Standardkurve mit seriellen 10-fachen Verdünnungen (10²-10⁷ Kopien/μL) der synthetischen DNA-Kontrolle. Tragen Sie die Ct-Werte gegen log(Konzentration) auf, um die RNA-Kopienzahlen in unbekannten Proben zu interpolieren.


Vorteile der sondenbasierten PCR gegenüber SYBR Green:

MerkmalSYBR-GrünSondenbasiert (dieses Kit)
SpezifitätBindet alle dsDNABindet nur an eine bestimmte Zielsequenz
Risiko von FehlalarmenHöherUnter
KostenUnterHöher (aber zuverlässiger)
BenutzerfreundlichkeitEinfacherErfordert eine Sondenkonstruktion

Verwendungszweck

Dieses Produkt ist nur für Forschungszwecke. Es ist nicht zugelassen für klinische Diagnostik oder therapeutische Verfahren.

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