Salmonella UNG Nukleinsäure-Nachweiskit (Real-Time PCR 50T/100T)

Beschreibung

Katalognummer: AP2409004
Spezifikationen: 50 Tests / 100 Tests
Lagerung: -20°C

Beschreibung des Produkts

Die Salmonella-Nukleinsäure-Nachweiskit ist eine Echtzeit PCR Assay für den schnellen, spezifischen und empfindlichen Nachweis von Salmonellen-DNA in einer Vielzahl von Probenarten, darunter Stuhl, Wasser, Gewebe und Lebensmittel. Salmonellen sind ein wichtiger lebensmittelbedingter Krankheitserreger, der häufig durch kontaminierte Eier, Geflügel und Fleisch übertragen wird.

Dieser Bausatz verwendet Quantitative PCR auf Basis von Fluoreszenzsonden (qPCR) Technologie zur Amplifikation eines spezifischen Fragments des Salmonella-Genoms. Die Ergebnisse werden anhand von Ct-Werten (Zyklusschwellenwert) oder über eine Standardkurvenquantifizierung zur Schätzung der Bakterienlast in der Probe ermittelt.

Wesentliche Merkmale

• ✅ Hohe Spezifität und Empfindlichkeit unter Verwendung der TaqMan-Fluoreszenzsondenmethode

• ✅ Kompatibel mit mehreren Echtzeit-PCR-Systemen (FAM-Kanal)

• ✅ Enthält Positiv- und Negativkontrollen zur Ergebnisvalidierung

• ✅ UNG-Enzym zur Beseitigung von Kontaminationsverschleppungen

• ✅ Geeignet für die Überwachung der Lebensmittelsicherheit, die Diagnose von Tierkrankheiten und die Forschung

Bausatz-Komponenten

Probenarten & Vorbereitung

• Abstriche (Oral/Kloakal): Bei Vögeln und Geflügel einen sterilen Tupfer in den Rachen und die Kloake einführen, vorsichtig drehen und dann in ein steriles Zentrifugenröhrchen geben.

• Vollblut: Verwenden Sie Nur EDTA-Antikoagulans. Verwenden Sie kein Heparin. Es wird frisches Blut empfohlen. Bei 2-8°C bis zu 7 Tage oder bei -20°C bis zu 3 Monate aufbewahren.

• Gewebeproben: ≤100 mg Leber oder andere Gewebe verwenden, mit 200-500 μl sterilem Wasser homogenisieren.

Anmerkung: Eine Voranreicherung ist erforderlich aufgrund von GB 4789.4-2016 Standards oder gleichwertig. Empfohlene Anreicherung in BPW-Bouillon (1:10 w/v), gefolgt von einer Inkubation bei 36 ± 1°C für 8-18 Stunden.

Bitte verwenden Sie DN/RNA-Extraktionskit (Kat. Nr. DP201) oder eine gleichwertige Methode zur Extraktion von Nukleinsäuren. Extrahierte DNA sollte auf Eis gelagert und umgehend getestet werden (≤7 Tage bei 4°C oder ≤6 Monate bei -20°C).

PCR-Protokoll

1. Vorbereitung der Reaktionsmischung:

   • Alle Reagenzien bei Raumtemperatur auftauen und kurz zentrifugieren.

   • Geben Sie 23 μl des Salmonella-PCR-Mixes in jedes PCR-Gefäß.

   • Geben Sie jeweils 2 μl der Proben-DNA, der Positivkontrolle oder der Negativkontrolle in jedes Röhrchen.

   • Letzter Band: 25 μL pro Reaktion.

2. PCR-Programm:

   • UNG-Behandlung: 50°C für 2 Minuten

   • Erste Denaturierung: 95°C für 5 Minuten

   • 40 Zyklen:

     • Denaturierung: 95°C für 10 Sekunden

     • Ausglühen/Verlängerung: 60°C für 35 Sekunden (FAM-Signal gesammelt)

3. Fluoreszenz-Kanal:

   • FAM (für ABI-Serie und andere qPCR-Geräte)

   • Fügen Sie ROX-Referenzfarbstoff hinzu, wenn das Gerät dies erfordert.

Interpretation der Ergebnisse

Hinweis: Verdächtige Ergebnisse können durch Inhibitoren (z. B. Alkohol, Antikoagulanzien) oder eine geringe DNA-Ausbeute verursacht werden. Wenn eine Aerosolkontamination ausgeschlossen wird und der Ct-Wert bei der erneuten Untersuchung <35 ist, gilt das Ergebnis als positiv.

Kriterien für die Qualitätskontrolle

• Positive Kontrolle: FAM Ct <28 mit S-förmiger Amplifikationskurve

• Negative Kontrolle: Kein Ct oder Ct ≥40 ohne S-Kurve

• Andernfalls werden die Ergebnisse als ungültig betrachtet und eine erneute Prüfung ist erforderlich.

Vorsichtsmaßnahmen

1. Zonierter Workflow: Trennen Sie die Bereiche vor der PCR, der Reagenzieneinstellung und der Amplifikation räumlich voneinander. Tragen Sie Schutzkleidung und wechseln Sie die Handschuhe zwischen den Bereichen.

2. Vermeiden Sie Kontamination: Verzögern Sie das Öffnen der Röhrchen nach der PCR, um Aerosolbildung zu vermeiden. Eine UV- oder chemische Sterilisation der Ausrüstung wird dringend empfohlen.

3. Gefrier-/Auftauzyklen: Wiederholtes Einfrieren und Auftauen der Reagenzien ist zu vermeiden. Vor Gebrauch vollständig auftauen und vorsichtig mischen.

4. Nur für Forschungszwecke: Dieser Bausatz ist für wissenschaftliche Forschung und Screening der Lebensmittel- und Umweltsicherheit. Nicht für die klinische Diagnostik geeignet.

Lagerung und Haltbarkeit

• Speichern unter -20°C

• Gültig für mindestens 12 Monate wenn ungeöffnet und ordnungsgemäß gelagert

• Vor Licht und wiederholten Gefrier- und Auftauzyklen schützen