Kit de detección de ácido nucleico de Salmonella UNG (PCR en tiempo real 50T/100T)

Descripción

Número de catálogo: AP2409004
Especificaciones: 50 Pruebas / 100 Pruebas
Almacenamiento: -20°C

Descripción del producto

En Kit de detección de ácido nucleico de Salmonella en tiempo real PCR ensayo diseñado para la detección rápida, específica y sensible de ADN de Salmonella en diversos tipos de muestras, como heces, agua, tejidos y alimentos. La salmonela es uno de los principales patógenos de origen alimentario que se transmite habitualmente a través de huevos, aves de corral y carne contaminados.

Este kit utiliza PCR cuantitativa basada en sonda fluorescente (qPCR) para amplificar un fragmento específico del genoma de Salmonella. Los resultados se determinan mediante valores Ct (umbral de ciclo) o mediante cuantificación de curva estándar para estimar la carga bacteriana en la muestra.

Características principales

• ✅ Alta especificidad y sensibilidad utilizando el método de la sonda de fluorescencia TaqMan

• ✅ Compatible con múltiples sistemas de PCR en tiempo real (canal FAM).

• ✅ Incluye controles positivos y negativos para la validación de resultados.

• ✅ Enzima UNG incluida para eliminar la contaminación por arrastre.

• ✅ Adecuado para la vigilancia de la seguridad alimentaria, el diagnóstico de enfermedades animales y la investigación.

Componentes del kit

Tipos de muestras y preparación

• Hisopos (Oral/Cloacal): Para las aves y las aves de corral, introduzca un hisopo estéril en la garganta y la cloaca, gírelo suavemente y, a continuación, transfiéralo a un tubo de centrífuga estéril.

• Sangre total: Utilice Sólo anticoagulante EDTA. No utilice heparina. Se recomienda utilizar sangre fresca. Conservar a 2-8°C hasta 7 días, o a -20°C hasta 3 meses.

• Muestras de tejido: Utilizar ≤100 mg de hígado u otros tejidos, homogeneizar con 200-500 μL de agua estéril.

Nota: Se requiere un enriquecimiento previo basado en GB 4789.4-2016 o equivalente. Enriquecimiento sugerido en caldo BPW (1:10 p/v), seguido de incubación a 36 ± 1°C durante 8-18 horas.

Utilice Kit de extracción de DN/ARN (n.º ref. DP201) o un método equivalente para extraer ácidos nucleicos. El ADN extraído debe conservarse en hielo y analizarse rápidamente (≤7 días a 4°C o ≤6 meses a -20°C).

Protocolo PCR

1. Preparación de la mezcla de reacción:

   • Descongelar todos los reactivos a temperatura ambiente y centrifugar brevemente.

   • Dispense 23 μL de Salmonella PCR mix en cada tubo de PCR.

   • Añada 2 μL de ADN de muestra, control positivo o control negativo a cada tubo, respectivamente.

   • Volumen final: 25 μL por reacción.

2. Programa PCR:

   • Tratamiento UNG: 50°C durante 2 min

   • Desnaturalización inicial: 95°C durante 5 min.

   • 40 ciclos:

     • Desnaturalización: 95°C durante 10 s

     • Recocido/Extensión: 60°C durante 35 seg (se recoge la señal FAM)

3. Canal de fluorescencia:

   • FAM (Para la serie ABI y otros instrumentos de qPCR)

   • Añadir colorante de referencia ROX si lo requiere el instrumento.

Interpretación de los resultados

Nota: Los resultados sospechosos pueden deberse a inhibidores (por ejemplo, alcohol, anticoagulantes) o a un bajo rendimiento de ADN. Si se descarta la contaminación por aerosoles y el Ct es <35 al repetir la prueba, el resultado se considera positivo.

Criterios de control de calidad

• Control positivo: FAM Ct <28 con curva de amplificación en forma de S

• Control negativo: Sin Ct o Ct ≥40 sin curva S.

• En caso contrario, los resultados se consideran inválidos y es necesario repetir la prueba.

Precauciones

1. Flujo de trabajo por zonas: Separe físicamente las zonas de pre-PCR, preparación de reactivos y amplificación. Utilice equipo de protección y cámbiese los guantes de una zona a otra.

2. Evite la contaminación: Retrasar la apertura del tubo después de la PCR para evitar la generación de aerosoles. Se recomienda encarecidamente la esterilización química o UV del equipo.

3. Ciclos de congelación/descongelación: Evitar la congelación-descongelación repetida de los reactivos. Descongelar completamente y mezclar suavemente antes de usar.

4. Uso exclusivo para investigación: Este kit es para investigación científica y cribado de seguridad alimentaria/medioambiental únicamente. No para uso diagnóstico clínico.

Almacenamiento y caducidad

• Tienda en -20°C

• Válido durante al menos 12 meses si no se abre y se almacena adecuadamente

• Proteger de la luz y de repetidos ciclos de congelación y descongelación