Kit de detecção de ácido nucleico de Salmonella UNG (PCR em tempo real 50T/100T)

Número de catálogo: AP2409004
Especificações: 50 Testes / 100 Testes
Armazenamento: -20°C

Descrição do produto

O Kit de detecção de ácido nucleico de Salmonella é um sistema em tempo real PCR ensaio projetado para a detecção rápida, específica e sensível de DNA de Salmonella em uma variedade de tipos de amostras, incluindo fezes, água, tecidos e alimentos. A Salmonella é um importante patógeno de origem alimentar comumente transmitido por meio de ovos, aves e carne contaminados.

Esse kit usa PCR quantitativo (qPCR) baseado em sonda fluorescente para amplificar um fragmento específico do genoma da Salmonella. Os resultados são determinados pelos valores de Ct (limite de ciclo) ou por meio da quantificação da curva padrão para estimar a carga bacteriana na amostra.

Principais recursos

• ✅ Alta especificidade e sensibilidade usando o método de sonda de fluorescência TaqMan

• Compatível com vários sistemas de PCR em tempo real (canal FAM)

• Inclui controles positivos e negativos para validação de resultados

• Enzima UNG incluída para eliminar a contaminação por transferência

• Adequado para monitoramento de segurança alimentar, diagnóstico de doenças animais e pesquisa

Componentes do kit

Tipos e preparação de amostras

• Swabs (Oral/Cloacal): Para aves e pássaros, insira um swab estéril na garganta e na cloaca, gire suavemente e transfira para um tubo de centrífuga estéril.

• Sangue total: Uso Somente anticoagulante EDTA. Não use heparina. Recomenda-se o uso de sangue fresco. Armazene a 2-8°C por até 7 dias ou a -20°C por até 3 meses.

• Amostras de tecido: Use ≤100 mg de fígado ou outros tecidos, homogeneize com 200-500 μL de água estéril.

Observação: O pré-enriquecimento é necessário com base em GB 4789.4-2016 ou equivalente. Sugere-se o enriquecimento em caldo BPW (1:10 p/v), seguido de incubação a 36 ± 1°C por 8-18 horas.

Por favor, use Kit de extração de DN/RNA (Nº de Cat. DP201) ou um método equivalente para extrair ácidos nucleicos. O DNA extraído deve ser mantido em gelo e testado imediatamente (≤7 dias a 4°C ou ≤6 meses a -20°C).

Protocolo de PCR

1. Preparação da mistura de reação:

   • Descongele todos os reagentes em temperatura ambiente e centrifugue brevemente.

   • Dispense 23 μL de mistura de PCR para Salmonella em cada tubo de PCR.

   • Adicione 2 μL de DNA de amostra, controle positivo ou controle negativo a cada tubo, respectivamente.

   • Volume final: 25 μL por reação.

2. Programa PCR:

   • Tratamento UNG: 50°C por 2 min

   • Desnaturação inicial: 95°C por 5 min

   • 40 ciclos:

     • Desnaturação: 95°C por 10 segundos

     • Recozimento/extensão: 60°C por 35 segundos (sinal FAM coletado)

3. Canal de fluorescência:

   • FAM (para a série ABI e outros instrumentos de qPCR)

   • Adicione o corante de referência ROX, se exigido pelo instrumento.

Interpretação de resultados

Observação: resultados suspeitos podem ser causados por inibidores (por exemplo, álcool, anticoagulantes) ou baixo rendimento de DNA. Se a contaminação por aerossol for excluída e o Ct for <35 em um novo teste, o resultado será considerado positivo.

Critérios de controle de qualidade

• Controle positivo: FAM Ct <28 com curva de amplificação em forma de S

• Controle negativo: Sem Ct ou Ct ≥40 sem curva S

• Caso contrário, os resultados serão considerados inválidos e será necessário refazer o teste.

Precauções

1. Fluxo de trabalho dividido em zonas: Use a separação física para as áreas de pré-PCR, preparação de reagentes e amplificação. Use equipamentos de proteção e troque as luvas entre as zonas.

2. Evite a contaminação: Atrasar a abertura do tubo após a PCR para evitar a geração de aerossol. Recomenda-se enfaticamente a esterilização química ou por UV do equipamento.

3. Ciclos de congelamento/descongelamento: Evite o congelamento e o descongelamento repetidos dos reagentes. Descongele totalmente e misture com cuidado antes de usar.

4. Somente para uso em pesquisa: Este kit é para pesquisa científica e triagem de segurança alimentar/ambiental apenas. Não se destina ao uso em diagnósticos clínicos.

Armazenamento e prazo de validade

• Armazenar em -20°C

• Válido por pelo menos 12 meses se não aberto e armazenado adequadamente

• Proteger da luz e de ciclos repetidos de congelamento e descongelamento